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Martes, 25/6/2019

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Biotecnología Aplicada

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Tesis - Sistemas ELISA en ensayos clínicos de vacunas y estudios seroepidemiológicos. - (135 páginas, 321 Kb)

Cuba, 2001

Resumen
Los ensayos inmunoenzimáticos son sencillos, sensibles y adecuados para procesar un elevado número de muestras. Los usados en ensayos clínicos de vacunas y pesquisajes seroepidemiológicos deben tener un amplio rango de cuantificación y ser capaces de determinar el grado de protección, siempre y cuando puedan establecerse correlatos con pruebas in vivo o in vitro funcionales. En caso de que se requiera cuantificar anticuerpos contra diferentes antígenos vacunales, es preferible que los ensayos tengan un similar procedimiento técnico, al igual que para su estandarización y validación.
Se determinaron las condiciones de trabajo idóneas de los ELISA indirectos para la cuantificación de anticuerpos contra proteínas de membrana externa de meningococo B y el polisacárido capsular de meningococo C, componentes de VA-MENGOC-BC, anticuerpos contra el polisacárido Vi de Salmonella typhi y antitoxinas tetánica y diftérica. Se estableció 1 hora a 37 °C respectivamente, para los pasos de incubación de las muestras y el conjugado. La dilución inicial de trabajo para las muestras fue de 1:200. Se optimizó el procedimiento de sensibilización de las placas de poliestireno para obtener la máxima densidad de biomoléculas adsorbidas.
Se alcanzaron, para la mayor parte de las muestras evaluadas, una imprecisión e inexactitud inferiores al 10 %. Las curvas de calibración, construidas con una función logit-log de 4 parámetros, se comportaron de forma lineal. Se obtuvo una buena correlación entre los ELISA de antitoxinas y los ensayos de neutralización in vivo, así como entre los ELISA para los componentes de VA-MENGOC-BC y los ensayos bactericidas en sangre total respectivos.
Los ELISA desarrollados demostraron ser útiles en la evaluación de la respuesta inmune inducida por vacunas y en estudios seroepidemiológicos. Se evidenció la buena respuesta contra VA-MENGOC-BC en los lactantes estudiados y la ausencia de hiporrespuesta al polisacárido C en los adolescentes reinmunizados con dos dosis de esta vacuna. Se detectó una baja concentración de anticuerpos contra el polisacárido Vi en el Municipio Alquízar, niveles protectores de antitoxina tetánica y la disminución, a partir de la adolescencia, de individuos con niveles aceptables de antitoxina diftérica.
 

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